基因工程中如何检测目的基因
基因工程中用于检测目的基因的技术被称为基因聚合酶链式反应(PCR)。这是一种高效的增强技术,可根据待检测的片段的序列定义一对引物,在存在(DNA聚合酶及其配体)条件下,以特定片段为靶点,进行特定片段的增强。增强后,可以进行实验检测,以便有效地确定基因片段的存在以及其表达量。PCR技术可用于快速检测大量的目的基因,包括诊断,遗传咨询,毒素及有害物质的检测,植物病原细菌的检测及其他目的的基因的检测。
PCR技术也可以与其他技术相结合,如免疫组化,Southern blot,Western blot等来进行目的基因的定量检测。免疫组化技术是一种根据免疫原性引起的反应来识别细胞膜蛋白,其抗原可以确定细胞株中位置等信息;Southern blot是用来检测RNA或DNA中单个片段的定量技术;Western blot(即蛋白印迹)用于定量蛋白的检测,通过直接对实验样本的蛋白进行分析和检测,来确定目的基因的存在及表达量。总之,运用PCR及其相关技术可以有效地检测目的基因。

基因工程中如何检测目的基因是否导入
基因工程的检测目的基因主要分为体外检测和体内检测。
体外检测利用了能够检测基因片段及其表达水平的分子生物学技术。常见的体外检测技术有polymerase chain reaction(PCR),Restriction Fragment Length Polymorphism(RFLP),Southern blotting,reverse Northern blotting,dot blotting,cDNA microarray,real-time PCR,single-strand conformational polymorphism(SSCP),denaturing gradient gel electrophoresis(DGGE),derivative banded laddering(DBL),etc。通过这些检测技术,可以检测基因的差异性。
体内检测需要进行基因遗传实验,通过观察不同样本的功能性结果,判断出基因的生物学功能,或者不同基因的变化情况。比如,可以检测基因的丰度、缺陷和突变等。更一般地讲,体内检测技术还可以利用比较田间作物和实验室模型动物之间的营养差异,比较功能生物学指标以判断基因的影响。
